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CIBLOT

CIBLOT - Plateforme de criblage

Criblage, Interface Biologie-chimie et Laboratoire Opérationnel de Transfert

Présentation Equipements Personnel Prestations Publications Tarifs Contacts et localisation

 

Présentation

La Plate-Forme est appelée CIBLOT pour "Criblage, Interface Biologie-chimie et Laboratoire Opérationnel de Transfert". L'objectif principal de CIBLOT est d'aider les chercheurs à identifier des petites molécules qui puissent être utilisées comme sondes pour moduler des fonctions biologiques, et pour fournir des têtes de séries pour découvrir des médicaments dirigés contre diverses maladies. CIBLOT constitue une interface privilégiée de collaboration entre biologistes et chimistes, et un cadre de transfert de compétences scientifiques et technologiques entre eux. Les services seront accessibles aux chercheurs académiques ou industriels extérieurs à la Faculté de Pharmacie. CIBLOT participera à la formation au criblage à haut débit et à la recherche pharmaceutique.

CIBLOT comprend les services suivants :

  • une installation de biotechnologie pour le développement et la validation des essais biochimiques ou cellulaires,
  • une collection de différentes chimiothèques,
  • une installation pour le criblage à haut débit (High-Throughput Screening, HTS).

La Plate-Forme CIBLOT a été fondée par Jean-Paul BLONDEAU, Bruno FIGADÈRE et Rodolphe FISCHMEISTER.

Son installation a commencé en 2006-2007 grâce aux financements publics du Ministère de la Recherche, de l’Université Paris-Sud, de l’INSERM, et de la Région Ile-de-France. Le financement a été complété par l’IPSIT sur son budget propre, car CIBLOT concrétise l’interface entre la biologie et la chimie dans la Faculté de Pharmacie, ce qui constitue l’un des principaux objectifs de l’Institut.

CIBLOT occupe 400 m² de locaux à la Faculté de Pharmacie. La Plate-Forme est opérationnelle depuis le 1er avril 2008.

Les missions de CIBLOT sont :

  • de sélectionner des cibles biologiques validées, c’est-à-dire pour lesquelles un rôle essentiel dans un processus physiologique ou pathologique a été démontré,
  • de constituer des collections de produits chimiques dévolues à l’identification de petites molécules modulatrices de processus biologiques spécifiques,
  • de développer des méthodes pour tester les effets de composés chimiques sur des cibles biologiques dans un format compatible avec le haut débit,
  • de réaliser le criblage à haut débit de composés qui réagissent avec les cibles, et de traiter les données de criblage.

Le développement de ces technologies a pour objectif de découvrir des composés têtes de séries qui soient utiles pour la recherche et/ou qui conduisent à la mise au point de nouveaux médicaments.

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Équipements

L’équipement de CIBLOT est basé sur un système robotique intégré Beckman/Biotek/Perkin-Elmer pour le criblage, et sur divers équipements généraux de laboratoire pour la mise au point des tests.

Ces équipements ont été acquis grâce à des financements provenant du programme IFR du Ministère de la Recherche, de l’Université Paris-Sud, de l’INSERM, de la Région Ile-de-France (CODDIM 2008 : Cardiovasculaire-Diabète) et des fonds propres de l’IPSIT.

  • Transfert de Liquides
  • Bras robotique
  • Lecteur de Plaques
  • Stockage et incubation de plaques
  • Equipements de laboratoire

Le Biomek FX Single Bridge 96 (Beckman Coulter) est équipé d’une tête de pipetage à 96 canaux qui permet de pipeter dans les microplaques de formats 96 et 384 puits. La tête multicanaux porte une pince intégrée permettant de déplacer les plaques et les boîtes d’embouts sur le plateau. Le Biomek FX est le cœur d’un système robotique qui inclut les appareils périphériques suivants : distributeur de réactifs, laveur de microplaque, carrousel de rangement, incubateur à CO2, lecteur de microplaques.

Le système robotique est dédié au criblage à haut débit (High-Throughput Screening, HTS). Le programme informatique de planification SAMI (SAGIAN Automated Method Interface) EX permet la mise en œuvre de méthodes automatisées et le contrôle simultané des appareils périphériques.

L’installation de criblage est équipée d’un lecteur Envision Xcite (Perkin Elmer) pour microplaques de 96, 384, et 1536 puits. Ce lecteur multifonctions permet de mesurer l’absorbance, la luminescence, et la fluorescence (en modes intensité, temps résolu et polarisation).

La possibilité d’analyser simultanément la luminescence et la fluorescence, ou l’émission de deux fluorophores, permet de mettre en œuvre les techniques de BRET et de FRET.

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Personnel

Catherine Brenner
Référent scientifique

Catherine Brenner est Directrice de Recherche au CNRS affectée à l’unité INSERM UMR-S 1180, Châtenay-Malabry et assure la responsabilité scientifique de CIBLOT. Catherine Brenner est spécialiste de la mitochondrie et de la mort cellulaire. Biochimiste des protéines de formation, elle a mis au point plusieurs tests biochimiques de mesure d’activité de protéines membranaires ou solubles pour la recherche de molécules à activité anti-cancéreuse ou cardioprotectrice. Elle sera à votre écoute pour la conception et la réalisation de projet de mise au point de test cellulaire et moléculaire en phase homogène ou hétérogène (ex : liposomes), d’étude de toxicologie et criblage de molécules à haut débit.

Delphine Courilleau
Responsable technique

Le Dr Delphine Courilleau est Ingénieure de l’Université Paris-Sud. Elle gère les installations de biotechnologie de CIBLOT (CIBLOT-Tech). Delphine Courilleau est responsable de l’expérimentation biologique, particulièrement en ce qui concerne le développement, la mise au point, la miniaturisation et la validation des essais biochimiques et cellulaires pour le criblage à haut débit (HTS).



Jean-Christophe Jullian

Jean-Christophe Jullian est Ingénieur de l’Université Paris-Sud (UMR CNRS 8076 "BioCIS" et de l’IPSIT). Il est responsable de l’entretien et du développement de l’installation de criblage (CIBLOT-Screen) et des collections chimiques (CIBLOT-Chem), et il gère le système de données chimio-informatiques (ISIS Base). Jean-Christophe Jullian est responsable des opérations de criblage à haut débit (High-Throughput Screening, HTS) et seconde les chercheurs dans l’utilisation des données de criblage.



Thierry Cresteil

Thierry Cresteil est Directeur de Recherche Cnrs émérite. Thierry Cresteil est spécialiste de la biotransformation des médicaments par les enzymes humains du métabolisme des xénobiotiques. Il réalise l’évaluation phénotypique de l’activité biologique de nouvelles molécules chimiques.

 

 

 

 

Anciens personnels

Jean-Paul Blondeau

Le Dr Jean-Paul Blondeau était Directeur de Recherche à l’INSERM et chercheur senior dans le domaine de l’Endocrinologie Moléculaire. Il est actuellement à la retraite et était affecté à l’IFR141. Jean-Paul Blondeau est le fondateur et assumait la direction scientifique de CIBLOT. Il étudiait également les interactions des polluants environnementaux avec l’axe thyroïdien, et il recherchait de nouveaux agonistes et antagonistes des récepteurs des hormones thyroïdiennes.

 

 

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Prestations

Cette plateforme de biotechnologie peut produire des cibles moléculaires et cellulaires, et permettre la mise au point de méthodes de criblage. Elle est flexible de façon à développer une grande diversité d'essais biologiques. CIBLOT-Tech est conduite et gérée par Delphine Courilleau. Une surface de laboratoires est dédiée au développement et à la validation des essais. Elle comprend une pièce équipée pour la culture de cellules eucaryotes et une pièce équipée pour la culture de bactéries. D'autres pièces sont équipées pour la purification et la caractérisation des protéines et des acides nucléiques (y compris une chambre froide +4°C) et pour la production d'ADN recombinant.

Les services fournis par CIBLOT-Tech comprennent :

  • La consultation sur la validation des cibles biologiques,
  • L'assistance pour le développement et la configuration des essais pour le criblage à haut débit ou tests secondaires.
  • La miniaturisation et la validation d'essais existants ou nouveaux, qui peuvent être effectuées en utilisant les installations de laboratoire de CIBLOT-Tech. Dans ce cas, le laboratoire utilisateur devra affecter un biologiste cellulaire/moléculaire formé (technicien, doctorant) à CIBLOT-Tech pendant le temps nécessaire au développement de l'essai.
  • L'assistance pour la sélection des composés et l'analyse des données.
  • Le criblage secondaire et la confirmation des touches primaires.

Tests Accessibles :

  • Tests biochimiques : cible connue et isolée :activité enzymatique (kinase, protéase, phosphodiestérase…) ; liaison à un récepteur (membranaire, nucléaire…) ; interaction protéine-protéine (immunoprécipitation, pull-down).
  • Tests subcellulaires en organelles isolées : mitochondries isolées de différents tissus animaux (potentiel de membrane, accumulation de calcium).
  • Tests cellulaires : cible connue mais non isolée ou voie de signalisation : activité enzymatique, de liaison.
  • Tests phénotypiques : cible moléculaire inconnue : apoptose, toxicité cellulaire, prolifération, sécrétion.

Chimiothèques :

CIBLOT peut accéder actuellement à une chimiothèque locale, et a acquis des composés libres de droits en provenance de fournisseurs commerciaux. Les collections sont entretenues par Jean-Christophe Jullian. L’identité des composés sélectionnés par criblage primaire, et dont l’activité biologique est confirmée après criblage secondaire, peut être vérifiée par LC/MS au SAMM (Service d’Analyses des Médicaments et Métabolites) de l’IPSIT.

  • La chimiothèque locale est sous la responsabilité du Dr. Bruno Figadère, qui est chimiste, Directeur de Recherche au CNRS et Directeur de l’UMR CNRS 8076 "BioCIS". Cette collection contient > 1500 composés propriétaires (produits de synthèse et produits d’origine naturelle) et s’accroît continuellement. La chimiothèque a été formatée en microplaques 96 puits (10 mg/ml dans le DMSO 100%) et est affiliée à la Chimiothèque Nationale Française. Les utilisateurs académiques de CIBLOT peuvent avoir un accès à la Chimiothèque Nationale qui contient > 33 000 composés propriétaires.
  • Chimiothèques commerciales complémentaires : L’IPSIT a acquis des composés libres de droits provenant de fournisseurs commerciaux.
    • « CiblotLib GreenPharma » : 6960 composés de synthèse sélectionnés sur la base de leurs caractéristiques « drug-like » et de leur diversité chimique maximale.
    • « GreenPharma Composés Naturels » : 240 composés naturels sélectionnés sur la base de leurs caractéristiques « drug-like » et correspondant à des familles phytochimiques diverses.
    • « Prestwick Chemical Library » : 1120 petites molécules sélectionnées parmi les médicaments approuvés par la FDA (U.S. Food and Drug Administration).
    • « Greenpharma Ligendo » : 320 composés intermédiaires métaboliques et ligands naturels.

Cellulothèque :

Un certain nombre de lignées cellulaires ou de cellules primaires sont disponibles sur demande. En cas d’implémentation de nouvelle lignée cellulaire sur la plate-forme, un test de détection de mycoplasmes sera réalisé.

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Publications

Nicolas C, Shittl J, Pertuiset C, Mehel H, Courilleau D, Jullian JC, Cresteil T, Blondeau JP, Colas C, Iorga B, Gueritte F, Gernigon N, Cintrat JC, Ambroise Y, Sylla M, Neveu N, Dumas F, Vandecasteele G, Fischmeister R, Brenner C.  Assay development and high-throughput screening to identify PDE2A activators to treat heart failure.Arch Cardiovasc Dis Supplements. (2014) 6, 43.

Courilleau D, Bouyssou P, Fischmeister R, Lezoualc’h F, Blondeau JP. The (R)-enantiomer of CE3F4 is a preferential inhibitor of human exchange protein directly activated by cyclic AMP isoform 1 (Epac1).Biochem Biophys Res Commun. (2013) 440(3), 443-8.

Courilleau D, Bisserier M, Jullian J-C, Lucas A, Bouyssou P, Fischmeister R, Blondeau J-P, Lezoualc’h F. Identification of a tetrahydroquinoline analog as a pharmacological inhibitor of the cAMP-binding protein Epac. J Biol Chem. (2012) 287, 44192-44202.

Ruiz M, Courilleau D, Jullian JC, Fortin D, Ventura-Clapier R, Blondeau JP, Garnier A. A cardiac-specific robotized cellular assay identified families of human ligands as inducers of PGC-1? expression and mitochondrial biogenesis. PLoS One (2012), 7, 10.

Lévy-Bimbot M, Major G, Courilleau D, Blondeau JP, Lévi Y. Tetrabromobisphenol-A disrupts thyroid hormone receptor alpha function in vitro : Use of fluorescence polarization to assay corepressor and coactivator peptide binding. Chemosphere (2012) 87, 782-788.

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Tarifs

Nous contacter.

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Contacts et localisation

CIBLOT est hébergée au 1er étage de la tour D1 de la Faculté de Pharmacie de Châtenay-Malabry.

CIBLOT
IPSIT
Tour D1, 1er
5, rue Jean-Baptiste Clément
92296 CHATENAY MALABRY
Tel : 01 46 83 52 45
Plan d'accès

Référent scientifique Catherine BRENNER 01 46 83 52 42 e-mail
Responsable technique Delphine COURILLEAU 01 46 83 52 45 e-mail

 

 

Partenaires

IPSIT - Faculté de Pharmacie
Tél. : 01 46 83 58 27
5, Rue J.B. Clément
92296 CHATENAY-MALABRY