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PIaimmo

PLATEFORME D’IMMUNO-MONITORAGE

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Présentation

La Plateforme d’IMmuno-MOnitorage propose son expertise dans le cadre de projets de recherche fondamentale et pré-clinique sur des modèles expérimentaux ainsi que des protocoles de recherche clinique chez l’Homme.

Les équipements de cytométrie en flux de la plateforme permettent le phénotypage des cellules par la détection de molécules membranaires et intracellulaires (biomarqueurs).

Cette détection prend en compte des paramètres cellulaires (taille, granulosité) et de fluorescence (apportée par des anticorps couplés à des fluorochromes dirigés contre des molécules cibles) ; selon le type de cytomètre en flux, jusqu’à 16 paramètres différents peuvent être détectés simultanément. Ces équipements permettent également de réaliser des tris cellulaires à haut débit, reposant sur des analyses cellulaires multiparamétriques, pour la purification de sous-populations cellulaires d'intérêt. Ces sous-populations seront ensuite étudiées dans un autre cadre (transcriptome, protéome, transfert in vivo, clonage...). Le trieur est dédié aux tris de cellules murines ou humaines ne contenant pas d’agents pathogènes pour l’homme.

La plateforme d'Immunomonitorage est également équipée pour l'étude du transcriptome et pour des analyses de signalisation cellulaire.

La plateforme est ouverte aux chercheurs des unités de recherche de l’IPSIT ainsi qu’à ceux des laboratoires extérieurs de statut public ou privé, dans le cadre de créneaux horaires prédéfinis. La plateforme peut développer de nouvelles applications, à la demande, en fonction du potentiel technologique de nos équipements et de leur évolution possible.

La technologie de cytométrie de masse a été récemment ajoutée au portfolio de la plateforme PIaimmo avec l’acquisition du premier cytomètre de masse en Europe (CyTOF, DVS Sciences®, Canada). Il s’agit d’un équipement d'excellence (Equipex FlowCyTech) acquis dans le cadre d’un Investissement d'avenir par trois partenaires (Division d'Immuno-Virologie du CEA-iMETI Institut pour les maladies médicales et les thérapies innovantes ; Université Paris-Sud Inserm UMRS-996 -Labex LERMIT-IPSIT et la société Bertin Pharma).

La cytométrie de masse est une technologie innovante qui combine la cytométrie en flux aux méthodes de spectrométrie de masse et dont les caractéristiques uniques permettent la détection de 40 biomarqueurs différents (120 dans l'avenir) avec un minimum d'interférence entre les étiquettes métalliques couplées aux anticorps. Cette technologie qui permet ainsi l'identification de populations cellulaires rares est en plein développement depuis 2010.

 


 

Equipements

 

Les appareils de la plateforme sont mis à la disposition des utilisateurs de façon assistée ou autonome, après une formation validée par le personnel de la plateforme. Charte des utilisateurs 

Les équipements mis à disposition par la plateforme d’Immunomonitorage sont les suivants :

 

FACSAria  (BD Biosciences®

 

 

 

Trieur de cellules, équipé de trois lasers : 405 nm, 488 nm, 640 nm qui permet la détection de 9 paramètres de fluorescence pour le phénotypage et le tri à haut débit d’une à quatre sous populations cellulaires en milieu stérile, en tubes ou en plaques.

Réservation à la journée.

 

 

Analyseur multi-couleur BD LSR-Fortessa (BD Biosciences®

 

 

Cet appareil est équipé de quatre lasers (405 nm, 488 nm, 561 nm, 640 nm) et permet l’analyse de 16 paramètres de fluorescence. Il est équipé d’un photomultiplicateur sur le paramètre FSC pour la détection de microparticules (taille inférieure à 1 µm).

Réservation à l’heure.




FACSCalibur (BD Biosciences®)

 

Ce cytomètre est équipé de 2 lasers (488 nm et 640 nm) et d'un passeur de plaques HTS 96 puits. Il permet l’analyse de cellules suivant 4 fluorescences différentes.

Réservation à l’heure.

 


Un poste d’analyse pour la cytométrie en flux

Logiciels : CellQuest®, Infinicyt®, FlowJO®, Modfit®, FCAP (CBA)®, Cytobank

 

LightCycler LC 480 (ROCHE®)

  PCR en temps réel (SYBR Green ou sondes de type TaqMan) pour l’étude de l’expression transcriptionnelle des gènes cellulaires ou du génotypage de lignées murines en format microplaques de 96 puits.

Réservation par créneau de deux heures (pour un même expérimentateur, deux créneaux maximum par jour).


Agilent® 2100 Bioanalyzer

 

 

L'instrument permet l’analyse précise et rapide de la qualité et de la quantité des ARN et ADN (produits de PCR, fragments de restriction). Le temps d’acquisition-analyse typique est de l’ordre de 30-45 min. Le Bioanalyzer utilise des cassettes microfluidiques à usage unique (Lab-On-Chip), chaque cassette autorise 12 points d’analyse + un standard.

 

 

 

 

CyTOF® Mass Cytometer (DVS Sciences®, Fluidigm Company)

 

 

 

 

 

Ce cytomètre de masse est situé sur le site du CEA-FAR et équipé d’un passeur de plaques. Il permet actuellement le phénotypage cellulaire sur au moins 40 paramètres.

 

 

 

 

 

 

 


 

Personnel

 

Dr Françoise BACHELERIE
Référent scientifique

Dr Hélène GARY
Ingénieur de Recherche Inserm
Responsable technique
Référent pour le CyTOF

Marie Laure AKNIN
Ingénieur d’études Inserm
Spécialiste en cytométrie en flux

 


 

Prestations

 

Assistance technique :

1) Elle comprend la maintenance de l'équipement et sa mise en route, la réservation des plages horaires, le recensement des utilisations et le support technique nécessaire à l'utilisation des instruments. Elle peut aussi inclure une prestation de service où les échantillons sont pris en charge par le personnel de la plateforme.

2) Des visites de plateforme et des formations techniques ciblées seront dispensées périodiquement par les ingénieurs de la plateforme.

 

Assistance scientifique :

Au-delà de l'assistance technique, une participation plus approfondie aux travaux des équipes utilisatrices est possible, par exemple pour la mise au point de nouvelles approches technologiques, ou pour des actes de haute technicité. Ces contributions sont alors envisagées sur la base d'une collaboration scientifique entre les utilisateurs et le personnel technique de la plateforme.


Horaires d’accès et de fonctionnement de la plateforme :

Du lundi au vendredi de 9h à 18h.

 


 

Publications :

Bignon A, Régent A, Klipfel L, Desnoyer A, de la Grange P, Martinez V, Lortholary O, Dalloul A, Mouthon L, Balabanian K. DUSP4-mediated accelerated T-cell senescence in idiopathic CD4 lymphopenia. Blood 2015, 125(16):2507-18.

Turbica I, Gallais Y, Gueguen C, Tharinger H, Al Sabbagh C, Gorges R, Gary-Gouy H, Kerdine-Römer S, Pallardy M, Mascarell L, Gleizes A, Chollet-Martin S. Ectosomes from neutrophil-like cells down-regulate nickel-induced dendritic cell maturation and promote Th2 polarization. J Leukoc Biol. 2015, 97(4):737-49.

Boujedidi H, Robert O, Bignon A, Cassard-Doulcier AM, Renoud ML, Gary-Gouy H, Hemon P, Tharinger H, Prévot S, Bachelerie F, Naveau S, Emilie D, Balabanian K, Perlemuter G. CXCR4 dysfunction in non-alcoholic steatohepatitis in mice and patients. Clin Sci (Lond). 2015, 128(4):257-67

Bignon A, Gaudin F, Hémon P, Tharinger H, Mayol K, Walzer T, Loetscher P, Peuchmaur M, Berrebi D, Balabanian K. CCR1 inhibition ameliorates the progression of lupus nephritis in NZB/W mice. J Immunol. 2014, 192(3):886-96

Calmette J, Ellouze M, Tran T, Karaki S, Ronin E, Capel F, Pallardy M, Bachelerie F, Krzysiek R, Emilie D, Schlecht-Louf G, Godot V. Glucocorticoid-induced leucine zipper enhanced expression in dendritic cells is sufficient to drive regulatory T cells expansion in vivo. J Immunol. 2014, 193(12):5863-72

 


 

Tarifs

Nous contacter.

 


 

Contact et localisation

Plateforme Immunomonitorage -Plaimmo-
32 rue des Carnets
92140 Clamart
Secrétariat Tel : 01 41 28 80 00

Nous sommes situés à proximité de l’Hôpital Antoine Béclère (lignes de bus n° 190, 295, 390, 189).

Plan d'accés 

Françoise BACHELERIE 01 41 28 80 05 e-mail
Hélène GARY 01 41 28 80 02  e-mail
Marie-Laure AKNIN 01 41 28 80 35 e-mail

 

 

 


 

 Réservations

 

Tout nouvel utilisateur doit contacter un des ingénieurs de la plateforme.

La réservation se fait par le site Quartzy : 

 

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Partenaires

IPSIT - Faculté de Pharmacie
Tél. : 01 46 83 58 27
5, Rue J.B. Clément
92296 CHATENAY-MALABRY