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PHIC

Plateforme d’Histologie souris Immunopathologie de Clamart

Présentation Equipements Personnel  Prestations Publications Tarifs  Contacts et localisation Réservations

 

Présentation

 

 
La plateforme d'Histologie Expérimentale localisée dans l'UMR-S996 à Clamart et créée en 2010 a pour objectif de proposer son expertise dans l'analyse immunopathologique de souris génétiquement modifiées et de modèles animaux de pathologies humaines inflammatoires et / ou hématologiques.  

  

  PHIC est dédié : 
  • A l'analyse macroscopique et histologique

    - de la peau

    - des organes lymphoïdes

    - du foie

    - des poumons

    - du tube digestif

  • Au développement de nouvelles techniques morphologiques appliquées à l'étude des petits animaux de laboratoire - interaction in situ de partenaires protéiques (Duo link) 
 PHIC repose sur un réseau :
  • D'animaleries incluant MIRCen (CEA, Fontenay-aux-Roses) et celles de l’Université Paris-Saclay (sites du Kremlin-Bicêtre, de Paul Brousse,de Béclère-Clamart, d'Orsay, de Châtenay-Malabry et de I'IGR)
  • De pathologistes experts en pathologie murine et humaine via le télépartage de lames virtuelles digitalisées (création de banques de données de lames virtuelles)
PHIC dispose :
  • D'une tissuthèque des organes sains de souris et organes de modèles animaux étudiés dans l'UMRS-996.
  • De lames digitalisées.

PHIC s'adresse aux académiques et industriels, au niveau local et national et propose des services modulables allant du conseil technique pour la réalisation de modèles animaux aux analyses morphologiques et in situ après étude préalable des projets scientifiques par le comité scientifique.

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Équipements

PHIC est animé par un groupe d’experts anatomo-pathologistes et équipé du matériel nécessaire à l’analyse Immunohistologique de tissus humains et murins.

HISTOLOGIE

Tissus inclus en paraffine 

La plateforme prend en charge les tissus préalablement fixés.  

  • L'automate de déshydratation de type carroussel permet l'imprégnation en paraffine des tissus.
 
  • La station d’Enrobage permet l’inclusion en paraffine et l’orientation des échantillons. 
 

 

 

 

Coupes 

  • Le microtome polyvalent semi-automatique permet de réaliser des coupes (de 4 µm à 30 µm) de tissus inclus en paraffine.
 

   

 Tissus congelés

La plateforme prend en charge les tissus préalablement congelés en OCT. 

Cryostat HM500  

  • permet de réaliser des coupes de tissus congelés (de 7 µm à 30 µm).
 
          
Spots cellulaires sur lame par cytocentrifugation

La plateforme prend en charge les suspensions cellulaires.                  

 

 

La cytocentrifugation Cytospin

  • Utilise une centrifugation contrôlée pour séparer et déposer une fine couche de cellules sur des lames, tout en préservant l’intégrité cellulaire.

 

Coloration / Marquage

La plateforme prend en charge les suspensions cellulaires. Les mises au point de coloration et des marquages immuno-histologiques sont effectués manuellement. A terme, les séries d'échantillons seront traitées par des automates ( projet en cours).

  • Un automate permettant l'application des colorations HE ou spéciales

 « Shandond Varistan* Gemini ES ».

 
 

 

 
  • Un automate permettant d’effectuer des marquages immunohistochimiques et d’hybridation in situ « Automate LEICA bond max ».
 

                 

 IMAGERIE

 Microscopie
  • Objectifs Zeiss : 10X, 20X, 40X et 100X (immersion)
  • Système fluorescence avec jeu de filtres 25HE
  • Logiciel d’analyses et de traitement d’images fixes: AxioVision (Carl Zeiss),   Cell F et Adobe Photoshop.
 
  • Un microscope droit semi-motorisé (Zeiss) est dédié à l’acquisition d’images de marquages à fluorescence et à fond clair.
  • Fonction apotome en projet d'acquisition

 

 

Lames virtuelles

Nous avons à disposition un scanner de modèle HPF-NANOZOOMER RS2.0(Hamamatsu) obtenu grâce à un financement ERM (Equipements de Recherche Mutualisés). Ce système permet de digitaliser des coupes histologiques (fluorescence et fond clair) dans le but de générer d'une part une tissuthèque et d'autre part, d'offrir la possibilité d'analyse anatomo-pathologique à distance via un réseau d'experts.

 

 

  • Ce scanner est doté d'une caméra digitale haute définition 3-CCD, et d'une fonction « Z-stack » offrant la numérisation multicouche à différents plans focaux d'une coupe histologique. Il permet deux modes de numérisation : x20 (mode standard : résolution de 0,46µm/pixel) et x40 (haute résolution de 0,23 µm/pixel) à haute vitesse (selon le mode environ 1 à 2.5 minutes pour une surface de 15 mm2) et produit une image virtuelle qui peut être analysée qualitativement et quantitativement.

 

 

 

Analyse des lames virtuelles

Nous disposons également du Système Virtuel Slides (Visilog / Noésis), logiciel d'analyse d'images pour lames virtuelles.

Virtual Slides est utilisé pour :

  • Visualiser, extraire et classer différents types de tissu
  • Identifier et dénombrer des cellules marquées en IHC
  • Obtenir des informations qualitatives et quantitatives
  • Quantifier l’expression des biomarqueurs et la morphologie des tissus
  • Régler facilement des seuils de détection en taille de cellule et en intensité de marquage
  • Gérer et analyser des doubles marquages sur les différents compartiments cellulaires
  • Effectuer des mesures sur l’image (distance entre cellules, taille des noyaux de certaines cellules)
  • L’identification, la classification, la quantification précise, rapide et automatique des
  • différents compartiments cellulaires (noyaux, membrane, cytoplasme).

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Personnel

Equipe

PHIC s'appuie sur l'expertise d'une anatomopathologiste (MCU/PH, PhD), et d'une responsable technique de la plateforme (IE INSERM). Un comité scientifique complète cette structure.

 
  • Directeur scientifique
Françoise  BACHELERIE
DR2 INSERM, PhD
tél : 01 41 28 80 02
francoise.bachelerie@u-psud.fr
   
  • Responsable technique
Françoise  GAUDIN-NOMÉ
IE INSERM
tél : 01 41 28 80 42
francoise.gaudin@u-psud.fr
   
  • Anotomopathologiste
Dominique BERREBI
MCU/PH, PhD
patsydominiqueberrebi@gmail.com

 

 

Comité scientifique

Françoise Bachelerie (DR2 INSERM, PhD), Karl Balabanian (CR1 INSERM, PhD), Anne-Marie Cassard-Doulcier (CR1 INSERM, PhD).

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Prestations

Notre plateforme propose :
  • Conseil technique pour la réalisation et l'analyse histologique de modèles animaux.
  • Examen macroscopique des organes.
Techniques Réalisées :
  • Histologie

    - Inclusion en paraffine

    - Coupes au microtome ou au cryostat, colorations de routine - HES et colorations spéciales.    

  • Immuno-histochimie /Immunofluorescence

    - Marqueurs utilisés en routine sur la plateforme

    - Marquage à façon (mise au point et validation des anticorps)

    - Digitalisation et analyse qualitative et quantitative de lames 

Techniques en développement :   
  • Duolink in situ PLA qui permet de détecter, visualiser et quantifier des protéines individuelles, des interactions et des modifications protéiques.
  • Analyse histologique par l'anatomopathologiste de PHIC appartenant au réseau d'experts en pathologie murine d'île-de-France. 
Formation d'utilisateurs aux équipements et aux techniques d'histologie
  • Microtomie (microtome et cryostat)
  • Techniques d'Immuno-histochimie et d' Immunofluorescence
  • A l'analyse quantitative de lames digitalisées

 

Portail de microscopie virtuelle
  • Digitalisation des lames, codification histologique et données cliniques
  • Echange de protocoles expérimentaux
  • Partage de modèles et groupes expérimentaux

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Publications

Leroux A, Ferrere G, Godie V, Cailleux F, Renoud ML, Gaudin F, Naveau S, Prévot S, Makhzami S, Perlemuter G, Cassard-Doulcier AM. Toxic lipids stored by Kupffer cells correlates with their pro-inflammatory phenotype at an early stage of steatohepatitis. Journal of Hepatology 2012, Mar 14.

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Tarifs

Les demandes de prestations ou de formations individuelles sont évaluées par le comité scientifique qui étudie la faisabilité du projet en fonction de la disponibilité des installations et des expertises sollicitées et son coût. 

Nous contacter pour toute information.

   


 

Contacts et localisation

Contacts :

Responsable scientifique : Françoise Bachelerie :   francoise.bachelerie@u-psud.fr

Anatomopathologiste : Dominique Berrebi (AP/HP) : dominique.berrebi@rbd.aphp.fr

Responsable technique : Françoise Gaudin (INSERM) : francoise.gaudin@u-psud.fr

 

Localisation :

 
 

32, rue des carnets - Clamart 92140 - France
    lignes de bus n° 190 - 295 - 390 - 189

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Réservations

Les formulaires de prestation disponibles sur ce site vous seront adressés par mail à votre demande :

francoise.gaudin@u-psud.fr


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Partenaires

IPSIT - Faculté de Pharmacie
Tél. : 01 46 83 58 27
5, Rue J.B. Clément
92296 CHATENAY-MALABRY